NANOLAB  3D Gel™即用型 3D细胞培养水凝胶

产品介绍：

即用型 3D 细胞培养水凝胶

产品描述和规格

3D Gel™ 为无动物源性多糖水凝胶体系，模仿天然细胞外基质（ECM） 环境。水凝胶为即用型中性 pH 溶液，室温即可稳定保存。使用时，只需与细

胞培养基混合即可形成水凝胶基质。水凝胶颜色透明，具有可渗透性，相容 于多种细胞成像系统。培养在水凝胶系统的细胞可在试验后轻松收获，水凝 胶也可注射，非常适合体内研究。3D Gel 为细胞创造一个具功能性且优 化的环境，让细胞感觉在家一样。从 2D 凝胶培养，3D 细胞培养到动物注射， 3D Gel 提供一个可以同时适用于体外研究与活体实验的共通操作平台。 TheWell 有两种水凝胶系统：

3D Gel – 适用于悬浮细胞系

3D Gel-RGD（RGD 肽修饰的 3D Gel）– 适用于贴壁细胞

应用说明：

产品：          3D Gel (Cat#: NANO001)

                3DGel-RGD (Cat#: NANO002)

仅供科研用途，不得用于诊断过程。

3D细胞培养

（可注射水凝胶制备）

材料：

3D Gel，细胞培养基，微量移液器或注射器，细胞培养孔板，细胞， 37 ˚C 水浴

方法：

1.     在 37˚C 预热 3D Gel 溶液和细胞培养基。

2. 向 4mL 3D Gel 溶液中加入 1mL 细胞悬液，使用微量移液器（或 快速涡旋振荡）轻轻混匀，尽量不要产生气泡。（对于水凝胶注射：混合 物可转移到注射器，水凝胶在稳定 15-30 分钟后即可用于注射。）

3.     将水凝胶混合液转移至细胞培养孔板。

注：倾斜/旋转培养板，以确保水凝胶在培养板上包被均匀。

不同细胞板的推荐体积如下表：

4.     等待 15 分钟至水凝胶稳定。

5.     小心加入细胞培养基以覆盖水凝胶溶液。

6.    将细胞培养板加入培养箱，每 48 小时换液

注：

l       预热 3D Gel 溶液有助于降低溶液粘度。

l       终细胞浓度可根据不同细胞类型调整。我们推荐 2×105 to 1×106。

2D 凝胶培养                                                                                                              

材料：

3D Gel，细胞培养基或 PBS，微量移液器，细胞培养孔板，细胞，37 ˚C 水浴

方法：

1.     在 37 ˚C 预热 3D Gel 溶液和细胞培养基。

2.     向 4mL VitroGel  3D 溶液中加入 1mL 细胞培养基(或 PBS)，使用微量 移液器（或快速涡旋振荡）轻轻混匀，尽量不要产生气泡。

3.     将水凝胶混合液转移至细胞培养孔板。

注：倾斜/旋转培养板，以确保水凝胶在培养板上包被均匀。

4.     等待 15 分钟至水凝胶稳定。

5.     吸出多余液体，小心将细胞加到水凝胶顶部。

6.     将细胞培养板加入培养箱，每 48 小时换液。

注：

l       预热 3D Gel 溶液有助于降低溶液粘度。

l       终细胞浓度可根据不同细胞类型调整。

NANOLAB  3D Gel™即用型 3D细胞培养水凝胶

初次使用说明

（请在使用产品前仔细阅读）

请根据不同的细胞系和培养基组分优化 VitroGel  3D 水凝胶系统，以得到更

好的结果。初次使用用户，强烈建议培养不同的细胞系时，都进行水凝胶浓 度梯度测试。

请参照以下步骤设置水凝胶浓度梯度：

1.     稀释：可通过稀释水凝胶溶液调节终水凝胶强度：直接将水凝胶溶液 与去离子水或 0.1X PBS（不含钙或镁离子）以 1:0-1:5（水凝胶溶液： 去离子水，v/v）室温混合。（终胶强度 1:0 > 1:1 > 1:2 > 1:3 > 1:4 > 1:5）

2.     成胶：稀释的水凝胶溶液和细胞培养基不同的混合比例会影响成胶速度 及终的胶强度。推荐的混合比例为 4:1-1:3（稀释的水凝胶：细胞培养 基，  v/v）。

l       相同稀释度的水凝胶溶液，添加越多细胞培养基，成胶越快。 对于稀释度较高的水凝胶溶液（eg. 1:3, 1:4 or 1:5），请使用较多 的细胞培养液混合，以确保水凝胶在合理的时间内成胶。

l       不同细胞培养基的推荐混合比例，请参考下表。

活/死细胞分析                                                                                        

材料：

培养于 3D Gel 系统中的细胞，活/死细胞染色液，PBS，微量移液器， 荧光显微镜

方法：

1.     移去覆盖于水凝胶之上的细胞培养基，并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

2.     用 PBS 制备 5X 活/死细胞染色溶液

3.     将活/死细胞染色溶液直接加入到水凝胶中并淹没整个凝胶。推荐体积如 下表：

4.     在黑暗中孵育 5 分钟，在荧光显微镜下观察。

注：

l    推荐使用 5X 染色液作为起始浓度。可基于不同细胞系和成像系统优化 更佳浓度。

l    细胞染色后应尽快分析

细胞收获：

材料：

培养于 3D Gel 系统中的细胞，0.1XPBS 或去离子水，离心管，微量移

液器，37˚C 水浴，漩涡震荡仪

方法：(使用 24 孔板，250μL 胶/孔为例)

1.     在 37℃水浴预热 0.1X PBS(或去离子水)及空的离心管。

2.     由培养箱取出细胞培养板，弃掉覆盖于水凝胶顶部的培养基。

3.     每孔加入 1 mL 预热的 0.1X PBS，并上下吹打以*混匀。

4.     将混合物加入预热的离心管。

5.     用 1 mL 预热的 0.1X PBS 润洗每个孔，并加入离心管中。

6.     上下吹打，充分混匀，并加入预热的 0.1X PBS 至 10mL。

7.     将离心管漩涡震荡 5-10 秒，并在 37℃水浴放置 1-5 分钟（可选）。

8.     1,000 rpm 离心 2-5 分钟，弃上清，收集细胞沉淀。

9.     用预热的 0.1X PBS 重悬细胞，如果需要可重复 6-8 步骤一次(可选)。

注：

l       使用预热的 0.1X  PBS 或去离子水，不要使用冷的溶液或 1X PBS（或 高离子浓度的细胞培养基）。

l       根据不同细胞系优化离心的速度和时间。

荧光染色：

材料：

培养于 3D Gel 系统中的细胞，PBS，微量移液器，固定液（4％甲醛 PBS 溶液），渗透液（0.1% Triton X-100 PBS 溶液），肌动蛋白抑制剂染色液，细 胞核染色液，微量移液管，荧光显微镜。

方法：

1.     移去覆盖于水凝胶之上的细胞培养基，并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

2.     将固定液加入水凝胶中，并在室温孵育 30 分钟。

3.     弃去固定液，并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

4.     加入渗透液并淹没整个凝胶，置于室温 5 分钟。

5.     弃去渗透液，并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

6.     加入肌动蛋白抑制剂染色液，室温，黑暗孵育 1 小时。

7.   弃去肌动蛋白抑制剂染色液，并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

8.     加入细胞核染色液，室温，黑暗孵育 5 分钟。

9.     弃去细胞核染色液， 并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

10.   荧光显微镜下观察。

注：

l       根据产品使用说明配制染色液。可根据不同细胞系和水凝胶调节染色液 终浓度。

l       在清洗步骤中，小心添加或移除溶液，以避免损失水凝胶/细胞。

l       孵育时间可根据不同细胞系调整。

l       水凝胶加入染色液后，应避免光照。

l       确保 PBS 冲洗步骤*，同时水凝胶在整个过程中都需要溶液覆盖。

组织学分析：

材料：

培养于 3D Gel 系统中的细胞，PBS，卡夹，石蜡，二甲苯，固定液（10％ 福尔马林），乙醇（50-100％）

方法：

1.     移去覆盖于水凝胶之上的细胞培养基，并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次

2.     将固定液加入水凝胶中，并在室温孵育 30 分钟。

3.     弃去固定液，并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

4.     将水凝胶放于卡夹中，用乙醇，按照以下顺序脱水：

50％（10 分钟） - 70％（10 分钟） - 80％（10 分钟） - 95％（10 分钟） - 100％（10 分钟） - 100％（10 分钟） - 100％（10  分钟）。

5.     将乙醇换为二甲苯，按照以下顺序脱水：

65％乙醇：35％二甲苯（10-15 分钟）-50％乙醇+50％二甲苯（10-15 分钟）- 35％乙醇+65％二甲苯（10-15 分钟） - 100％二甲苯（10-15 分钟） - 100％二甲苯（10-15 分钟） - 100％二甲苯（10 分钟）

6.     将二甲苯换为石蜡，按照以下顺序：

65％二甲苯+35％石蜡(30  分钟)  -  50％二甲苯+50％石蜡(30 分钟) -

35％二甲苯+65％石蜡(30 分钟) - 100% 石蜡 (1-2 小时) - 100% 石 蜡(1-2 小时或过夜)

7.     嵌入新鲜的石蜡中后，切片，放于显微镜载玻片上。

8.     根据不同的应用进行染色和组装。

注：

l    根据不同细胞系和水凝胶大小优化孵育时间。确保水凝胶在整个过程中 都被溶液覆盖。

表 B：不同细胞的推荐稀释比例和混合比例