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品牌 | 其他品牌 | 货号 | 3D Gel /3D Gel-RGD |
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规格 | 10ml/瓶 | 供货周期 | 现货 |
应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,制药 |
NANOLAB 3D Gel™即用型 3D细胞培养水凝胶
产品介绍:
即用型 3D 细胞培养水凝胶
产品描述和规格
3D Gel™ 为无动物源性多糖水凝胶体系,模仿天然细胞外基质(ECM) 环境。水凝胶为即用型中性 pH 溶液,室温即可稳定保存。使用时,只需与细
胞培养基混合即可形成水凝胶基质。水凝胶颜色透明,具有可渗透性,相容 于多种细胞成像系统。培养在水凝胶系统的细胞可在试验后轻松收获,水凝 胶也可注射,非常适合体内研究。3D Gel 为细胞创造一个具功能性且优 化的环境,让细胞感觉在家一样。从 2D 凝胶培养,3D 细胞培养到动物注射, 3D Gel 提供一个可以同时适用于体外研究与活体实验的共通操作平台。 TheWell 有两种水凝胶系统:
3D Gel – 适用于悬浮细胞系
3D Gel-RGD(RGD 肽修饰的 3D Gel)– 适用于贴壁细胞
应用说明:
产品: 3D Gel (Cat#: NANO001)
3DGel-RGD (Cat#: NANO002)
3D细胞培养
(可注射水凝胶制备)
材料:
3D Gel,细胞培养基,微量移液器或注射器,细胞培养孔板,细胞, 37 ˚C 水浴
方法:
1. 在 37˚C 预热 3D Gel 溶液和细胞培养基。
2. 向 4mL 3D Gel 溶液中加入 1mL 细胞悬液,使用微量移液器(或 快速涡旋振荡)轻轻混匀,尽量不要产生气泡。(对于水凝胶注射:混合 物可转移到注射器,水凝胶在稳定 15-30 分钟后即可用于注射。)
3. 将水凝胶混合液转移至细胞培养孔板。
注:倾斜/旋转培养板,以确保水凝胶在培养板上包被均匀。
不同细胞板的推荐体积如下表:
4. 等待 15 分钟至水凝胶稳定。
5. 小心加入细胞培养基以覆盖水凝胶溶液。
6. 将细胞培养板加入培养箱,每 48 小时换液
注:
l 预热 3D Gel 溶液有助于降低溶液粘度。
l 终细胞浓度可根据不同细胞类型调整。我们推荐 2×105 to 1×106。
2D 凝胶培养
材料:
3D Gel,细胞培养基或 PBS,微量移液器,细胞培养孔板,细胞,37 ˚C 水浴
方法:
1. 在 37 ˚C 预热 3D Gel 溶液和细胞培养基。
2. 向 4mL VitroGel 3D 溶液中加入 1mL 细胞培养基(或 PBS),使用微量 移液器(或快速涡旋振荡)轻轻混匀,尽量不要产生气泡。
3. 将水凝胶混合液转移至细胞培养孔板。
注:倾斜/旋转培养板,以确保水凝胶在培养板上包被均匀。
4. 等待 15 分钟至水凝胶稳定。
5. 吸出多余液体,小心将细胞加到水凝胶顶部。
6. 将细胞培养板加入培养箱,每 48 小时换液。
注:
l 预热 3D Gel 溶液有助于降低溶液粘度。
l 终细胞浓度可根据不同细胞类型调整。
NANOLAB 3D Gel™即用型 3D细胞培养水凝胶
初次使用说明
(请在使用产品前仔细阅读)
请根据不同的细胞系和培养基组分优化 VitroGel 3D 水凝胶系统,以得到更
好的结果。初次使用用户,强烈建议培养不同的细胞系时,都进行水凝胶浓 度梯度测试。
请参照以下步骤设置水凝胶浓度梯度:
1. 稀释:可通过稀释水凝胶溶液调节终水凝胶强度:直接将水凝胶溶液 与去离子水或 0.1X PBS(不含钙或镁离子)以 1:0-1:5(水凝胶溶液: 去离子水,v/v)室温混合。(终胶强度 1:0 > 1:1 > 1:2 > 1:3 > 1:4 > 1:5)
2. 成胶:稀释的水凝胶溶液和细胞培养基不同的混合比例会影响成胶速度 及终的胶强度。推荐的混合比例为 4:1-1:3(稀释的水凝胶:细胞培养 基, v/v)。
l 相同稀释度的水凝胶溶液,添加越多细胞培养基,成胶越快。 对于稀释度较高的水凝胶溶液(eg. 1:3, 1:4 or 1:5),请使用较多 的细胞培养液混合,以确保水凝胶在合理的时间内成胶。
l 不同细胞培养基的推荐混合比例,请参考下表。
活/死细胞分析
材料:
培养于 3D Gel 系统中的细胞,活/死细胞染色液,PBS,微量移液器, 荧光显微镜
方法:
1. 移去覆盖于水凝胶之上的细胞培养基,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。
2. 用 PBS 制备 5X 活/死细胞染色溶液
3. 将活/死细胞染色溶液直接加入到水凝胶中并淹没整个凝胶。推荐体积如 下表:
4. 在黑暗中孵育 5 分钟,在荧光显微镜下观察。
注:
l 推荐使用 5X 染色液作为起始浓度。可基于不同细胞系和成像系统优化 更佳浓度。
l 细胞染色后应尽快分析
细胞收获:
材料:
培养于 3D Gel 系统中的细胞,0.1XPBS 或去离子水,离心管,微量移
液器,37˚C 水浴,漩涡震荡仪
方法:(使用 24 孔板,250μL 胶/孔为例)
1. 在 37℃水浴预热 0.1X PBS(或去离子水)及空的离心管。
2. 由培养箱取出细胞培养板,弃掉覆盖于水凝胶顶部的培养基。
3. 每孔加入 1 mL 预热的 0.1X PBS,并上下吹打以*混匀。
4. 将混合物加入预热的离心管。
5. 用 1 mL 预热的 0.1X PBS 润洗每个孔,并加入离心管中。
6. 上下吹打,充分混匀,并加入预热的 0.1X PBS 至 10mL。
7. 将离心管漩涡震荡 5-10 秒,并在 37℃水浴放置 1-5 分钟(可选)。
8. 1,000 rpm 离心 2-5 分钟,弃上清,收集细胞沉淀。
9. 用预热的 0.1X PBS 重悬细胞,如果需要可重复 6-8 步骤一次(可选)。
注:
l 使用预热的 0.1X PBS 或去离子水,不要使用冷的溶液或 1X PBS(或 高离子浓度的细胞培养基)。
l 根据不同细胞系优化离心的速度和时间。
荧光染色:
材料:
培养于 3D Gel 系统中的细胞,PBS,微量移液器,固定液(4%甲醛 PBS 溶液),渗透液(0.1% Triton X-100 PBS 溶液),肌动蛋白抑制剂染色液,细 胞核染色液,微量移液管,荧光显微镜。
方法:
1. 移去覆盖于水凝胶之上的细胞培养基,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。
2. 将固定液加入水凝胶中,并在室温孵育 30 分钟。
3. 弃去固定液,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。
4. 加入渗透液并淹没整个凝胶,置于室温 5 分钟。
5. 弃去渗透液,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。
6. 加入肌动蛋白抑制剂染色液,室温,黑暗孵育 1 小时。
7. 弃去肌动蛋白抑制剂染色液,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。
8. 加入细胞核染色液,室温,黑暗孵育 5 分钟。
9. 弃去细胞核染色液, 并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。
10. 荧光显微镜下观察。
注:
l 根据产品使用说明配制染色液。可根据不同细胞系和水凝胶调节染色液 终浓度。
l 在清洗步骤中,小心添加或移除溶液,以避免损失水凝胶/细胞。
l 孵育时间可根据不同细胞系调整。
l 水凝胶加入染色液后,应避免光照。
l 确保 PBS 冲洗步骤*,同时水凝胶在整个过程中都需要溶液覆盖。
组织学分析:
材料:
培养于 3D Gel 系统中的细胞,PBS,卡夹,石蜡,二甲苯,固定液(10% 福尔马林),乙醇(50-100%)
方法:
1. 移去覆盖于水凝胶之上的细胞培养基,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次
2. 将固定液加入水凝胶中,并在室温孵育 30 分钟。
3. 弃去固定液,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。
4. 将水凝胶放于卡夹中,用乙醇,按照以下顺序脱水:
50%(10 分钟) - 70%(10 分钟) - 80%(10 分钟) - 95%(10 分钟) - 100%(10 分钟) - 100%(10 分钟) - 100%(10 分钟)。
5. 将乙醇换为二甲苯,按照以下顺序脱水:
65%乙醇:35%二甲苯(10-15 分钟)-50%乙醇+50%二甲苯(10-15 分钟)- 35%乙醇+65%二甲苯(10-15 分钟) - 100%二甲苯(10-15 分钟) - 100%二甲苯(10-15 分钟) - 100%二甲苯(10 分钟)
6. 将二甲苯换为石蜡,按照以下顺序:
65%二甲苯+35%石蜡(30 分钟) - 50%二甲苯+50%石蜡(30 分钟) -
35%二甲苯+65%石蜡(30 分钟) - 100% 石蜡 (1-2 小时) - 100% 石 蜡(1-2 小时或过夜)
7. 嵌入新鲜的石蜡中后,切片,放于显微镜载玻片上。
8. 根据不同的应用进行染色和组装。
注:
l 根据不同细胞系和水凝胶大小优化孵育时间。确保水凝胶在整个过程中 都被溶液覆盖。
表 B:不同细胞的推荐稀释比例和混合比例
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