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随着生物质谱技术的快速发展,蛋白质和多肽分析的分辨率、灵敏度、准确性、鉴定能力大为提高。尤其是Top-down蛋白质鉴定方法大量使用后,传统的一维、二维电泳或液相色谱等样品制备技术已经不能满足需要。分析前如何降低样品的复杂程度、获得完整蛋白质、富集低丰度蛋白质、降低高丰度蛋白质对低丰度蛋白质的干扰、保留蛋白质的各种翻译后修饰状态、提高样品处理通量等,已成为蛋白质样品制备方法的重要前提。
美国Protein Discovery公司(现已被英国Expedeon公司收购)推出了一套新颖的蛋白质分组系统—Gelfree 8100。该系统使用凝胶洗脱液相组分截留电泳技术(gel-eluted liquid fraction entrapment electrophoresis,GELFrEE),基于蛋白质分子量的不同,对完整蛋白质进行分组,使用移液器在液相中回收蛋白质。该系统能在短时间内同时处理8个样品。在3.5kDa—500kDa范围内,相对于其它传统分组方法,具有上样量大、重现性好、分辨率高、回收率高、分离速度快和操作简单的优点。能增大蛋白质组分析的覆盖范围,改善后期质谱分析的结果,提高蛋白质鉴定结果的可信度。
Gelfree 8100蛋白质分组系统由主机和8通道电泳槽两部分构成。主机设计紧凑,能为8个独立的电泳通道提供电压。使用触摸屏,可以设置电压、分组数和使用的通道数等参数。运行过程中,触摸屏实时显示每个通道电泳状态及电压电流值。电泳槽由五个部分组成,分别是:阴极缓冲液槽、上样槽、电泳凝胶管、样品收集槽、阳极缓冲液槽。电泳凝胶管是内装预制SDS-PAGE胶的玻璃管。缓冲液槽与上样槽及收集槽之间由一个截留分子量为3.5kDa的膜分隔开。